Buferne rešitve so tekočine na vodni osnovi, ki vključujejo tako šibko kislino kot njeno konjugirano bazo. Zaradi svoje kemije lahko puferske raztopine ohranjajo pH (kislost) na skoraj konstantni ravni, tudi ko se zgodijo kemične spremembe. Puferski sistemi se pojavljajo v naravi, vendar so izredno koristni tudi v kemiji.
Uporaba za vmesne rešitve
V organskih sistemih naravne puferske raztopine ohranjajo pH na dosledni ravni, kar omogoča, da se zgodijo biokemične reakcije, ne da bi škodili organizmu. Ko biologi preučujejo biološke procese, morajo vzdrževati enak konsistenten pH; za to so uporabili pripravljene raztopine pufra. Buferne raztopine so bile prvič opisane leta 1966; danes se uporabljajo številni enaki blažilniki.
Za koristnost bioloških puferjev mora ustrezati več kriterijev. Zlasti morajo biti v vodi topni, ne pa topni v organskih topilih. Ne bi smeli preiti skozi celične membrane. Poleg tega morajo biti nestrupene, inertne in stabilne v vseh poskusih, za katere se uporabljajo.
Puferne raztopine se naravno pojavljajo v krvni plazmi, zato kri ohranja konstantno pH med 7,35 in 7,45. Vmesne raztopine se uporabljajo tudi pri:
- fermentacijski procesi
- umirajoče tkanine
- kemijska analiza
- umerjanje pH metrov
- Črpanje DNK
Kaj je pufer Tris?
Tris je kratek za tris (hidroksimetil) aminometan, kemično spojino, ki se pogosto uporablja v fiziološki raztopini, ker je izotonična in netoksična. Ker ima Tris pKa 8,1 in pH vrednost med 7 in 9, se raztopine Tris pufra pogosto uporabljajo tudi v različnih kemijskih analizah in postopkih, vključno z ekstrakcijo DNK. Pomembno je vedeti, da se pH v raztopini tris pufra spreminja s temperaturo raztopine.
Kako pripraviti Tris Buffer
Trško dostopno raztopino tris puferja je enostavno najti, vendar je mogoče izdelati sami z ustrezno opremo.
Materiali:
Količino vsakega izdelka, ki ga potrebujete, izračunajte na podlagi molske koncentracije želene raztopine in količine pufra, ki ga potrebujete.
- tris (hidroksimetil) aminometan
- destilirana deionizirana voda
- HCl
Postopek:
- Začnite z določitvijo koncentracije (molarnost) in prostornino vmesnika Tris, ki ga želite izdelati. Na primer raztopina Tris pufra, ki se uporablja za fiziološko raztopino, se giblje od 10 do 100 mM. Ko se odločite, kaj izdelujete, izračunajte število molov Tris, ki so potrebni tako, da pomnožite molsko koncentracijo pufra z volumnom pufra, ki je narejen. (moli Tris = mol / L x L)
- Nato določite, koliko gramov Tris je to tako, da množite število molov z molekulsko maso Tris (121,14 g / mol). grami Tris = (moli) x (121,14 g / mol)
- Tris raztopite v destilirani deionizirani vodi, 1/3 do 1/2 želenega končnega volumna.
- Mešamo v HCl (npr. 1M HCl) do naslednjega pH meter vam da želeni pH za raztopino Tris pufra.
- Pufer razredčimo z vodo, da dosežemo želeni končni volumen raztopine.
Ko je raztopina pripravljena, jo lahko mesece hranimo na sterilnem mestu pri sobni temperaturi. Dolg rok uporabe raztopine tris pufra je mogoč, ker raztopina ne vsebuje beljakovin.