Fiziološka fiziološka raztopina ali raztopina PBS

PBS oz fosfatno pufran slana je puferska raztopina to je še posebej dragoceno, saj posnema koncentracijo ionov, osmolarnost in pH tekočin človeškega telesa. Z drugimi besedami, to je izotonično za človeške raztopine, zato je manj verjetno, da v bioloških, medicinskih ali biokemijskih raziskavah povzroči poškodbe celic, strupenost ali neželene padavine.

Obstaja več receptov za pripravo raztopine PBS. Bistvena raztopina vsebuje vodo, natrijev hidrogenfosfat in natrijev klorid. Nekateri pripravki vsebujejo kalijev klorid in kalijev dihidrogenfosfat. EDTA se lahko doda tudi v celični pripravi, da se prepreči gruščanje.

Fiziološka raztopina s fosfati ni idealna za uporabo v rešitvah ki vsebujejo dvovalentni kationi (Fe²⁺, Zn²⁺), ker lahko pride do padavin. Vendar nekatere raztopine PBS vsebujejo kalcij ali magnezij. Upoštevajte tudi, da fosfat lahko zavira encimske reakcije. Bodite posebno pozorni na to potencialno pomanjkljivost pri delu z DNK. Medtem ko je PBS odličen za fiziološko znanost, bodite pozorni, da lahko fosfat v vzorcu, забуženem s PBS, obori, če vzorec pomešamo z etanolom.

Končna koncentracija 1X PBS ima končno koncentracijo 10 mM PO₄³⁻137 mM NaCl in 2,7 mM KCl. Tu je končna koncentracija reagentov v raztopini:

Glede na vaš namen lahko pripravite 1X, 5X ali 10X PBS. Mnogi ljudje preprosto kupijo tablete PBS, jih raztopijo v destilirani vodi in po potrebi prilagodijo pH s klorovodikovo kislino ali natrijev hidroksid. Vendar je enostavno narediti rešitev iz nič. Tu so recepti za 1X in 10X fiziološko raztopino s fosfati:

1. Raztopite reagenske soli v 800 ml destilirane vode.
2. S klorovodikovo kislino prilagodite pH na želeno raven. Običajno je to 7,4 ali 7,2. Uporabite merilnik pH za merjenje pH, ne pH papirja ali druge nenatančne tehnike.
3. Dodamo destilirano vodo, da dosežemo končno prostornino 1 liter.

Pri nekaterih aplikacijah sterilizacija ni potrebna, če pa jo sterilizirate, raztopino razpršite v alikvote in avtoklavirajte 20 minut pri 1,05 kg / cm²) ali uporabite filtrirno sterilizacijo.

Fiziološka raztopina s fosfati je lahko shranjeno na sobni temperaturi. Lahko tudi v hladilniku, vendar lahko 5X in 10X raztopina oborina, ko se ohladi. Če morate ohladiti koncentrirano raztopino, jo najprej hranite pri sobni temperaturi, dokler se ne prepričate, da se soli popolnoma raztopijo. Če pride do padavin, segrevanje temperature vrne v raztopino. Rok uporabnosti hladilne raztopine je 1 mesec.

10X je koncentrirana ali osnovna raztopina, ki jo lahko razredčimo, da dobimo 1X ali normalno raztopino. Za normalno redčenje je treba 5-krat raztopino raztopiti 5-krat, 10-kratno raztopino pa 10-krat.

Za pripravo 1-litrske delovne raztopine 1X PBS-ja iz 10-kratne raztopine PBS dodamo 100 ml raztopine 10X 900 ml vode. To samo spremeni koncentracijo raztopine, ne grama ali molarne količine reagentov. PH ne sme vplivati.

Druga priljubljena puferska raztopina je dulbeccova fosfatna fiziološka raztopina ali DPBS. DPBS se tako kot PBS uporablja za biološke raziskave in puferje v območju pH 7,2 do 7,6. Shranjujemo ga lahko pri sobni temperaturi. Dulbeccova raztopina vsebuje nižjo koncentracijo fosfata. To je 8,1 mM mM fosfatnih ionov, medtem ko je redni PBS 10 mM fosfata. Recept za 1x DPBS je:

Soline raztopimo v 800 ml vode. Prilagodite pH na 7,2 do 76 z uporabo klorovodikove kisline. Končni volumen prilagodite na 1000 ml z vodo. Avtoklavirajte 20 minut pri 121 ° C.

• Dulbecco, R.; et al. (1954). "Tvorba oblog in izolacija čistih linij z virusi poliomielitisa". J. Exp Med. 99 (2): 167–182.
• "Fiziološka raztopina s fosfati (PBS." Protokoli hladnega pomladnega pristana (2006). Laboratorijski tisk hladnega pomladnega pristana.