TAE pufer je raztopina, sestavljena iz baze Tris, ocetne kisline in EDTA (Tris-acetat-EDTA). Je zgodovinsko najpogostejši pufer, ki se uporablja za agarozni gel elektroforeza v analizah izdelkov DNK, ki izhajajo iz PCR ojačanje, DNK čistilnih protokolov oz Kloniranje DNK poskusi.
Ta pufer ima nizko ionsko trdnost in nizko pufersko sposobnost. Najbolj primeren je za elektroforezo velikih (> 20 kilobaz) kosov DNK in jih bo treba pogosto zamenjati ali recirkulirati za daljše (> 4 ure) trajanje gela. Glede na to boste morda želeli razmisliti o izdelavi več serij medpomnilnika.
Glede na to, da je medpomnilnik enostavno narediti in korake je mogoče izvesti hitro, izdelava več paketov hkrati ne bi smela biti posebno zamudna ali težka. S pomočjo spodnjih navodil naj bi trajalo samo 30 minut, da se TAE vmesnik pripravi.
Kaj potrebujete za vmesnik TAE
Ker izdelava TAE blažilnika zahteva le hiter in preprost niz navodil, število potrebnih materialov ni pretirano. Potrebovali boste le dinatrijevo sol EDTA (etilendiaminetetraocetna kislina), Tris bazo in ledeniško ocetno kislino.
Za izdelavo pufra sta potrebna tudi pH-meter in kalibracijski standardi, kot je primerno. Potrebovali boste tudi 600-mililitrske in 1500-mililitrske čaše ali bučke ter diplomirane jeklenke. Končno boste potrebovali deionizirano vodo, mešalnike in plošče za mešanje.
V naslednjih navodilih je teža formule (atomska masa vsakega elementa se pomnoži s številom atomov, nato se njihova masa sešteje) skrajšano kot FW.
Pripravite osnovno raztopino EDTA
Pred časom je pripravljena rešitev EDTA. EDTA ne bo šel popolnoma v raztopino, dokler se pH ne naravna na približno 8,0. Za 500 mililitrsko zalogo raztopina 0,5 M (molarnost ali koncentracija) EDTA, tehta 93,05 gramov dinatrijeve soli EDTA (FW = 372,2). Raztopimo ga v 400-mililitrski deionizirani vodi in nastavimo pH z natrijevim hidroksidom (NaOH). Raztopino dolijte do končne prostornine 500 mililitrov.
Ustvarite svojo zalogo
Naredite koncentrirano (50x) osnovno raztopino TAE tako, da odtehtate 242 gramov Tris baze (FW = 121,14) in jo raztopite v približno 750 mililitrih deionizirane vode. Previdno dodajte 57,1 mililitra ledene kisline in 100 mililitrov 0,5 M EDTA (pH 8,0).
Po tem prilagodite raztopino na končni volumen 1 litra. To osnovno raztopino lahko hranite pri sobni temperaturi. PH tega pufra ni prilagojen in mora znašati približno 8,5.
Pripravite delovno raztopino puferja TAE
Delovna raztopina 1x TAE pufra je narejena s preprostim razredčenjem osnovne raztopine 50x v deionizirani vodi. Končne koncentracije topil so 40 mM (milimolarni) tris-acetat in 1 mM EDTA. Pufer je zdaj pripravljen za uporabo pri uporabi agaroznega gela.
Zavijanje
Preden začnete preveriti, ali imate vse zgoraj naštete materiale za TAE, preverite zalog. Vaše osebje za oskrbo bi vam moralo sporočiti, ali imajo na zalogi vse predmete, ki jih potrebujete. Ne želite, da na sredini postopka nekaj manjka.